رنگ آمیزی تک سلولی ها به روش حیاتی

در این رنگ آمیزی سلول زنده است اما در طول زمان و در اثر غلظت زیاد سلول به تدریج می میرد.

اگر هدف مطالعه و شناسایی قسمت های مختلف سلول زنده باشد باید از موادی استفاده شود که به سلول آسیبی وارد نکند و حتی الامکان محتویات درون سلولی را همان گونه که هست نگه دارد. چنین رنگ هایی را رنگهای حیاتی گویند که مهم ترین آنها قرمز خنثی ( رنگ مخصوص واکوئل ) ، سبز ژانوس( رنگ مخصوص میتوکندری ها)  و آبی متیل می باشد. نکته مهم در تهیه محلول رنگ های حیاتی این است که این محلول ها باید به طور تازه مورد استفاده قرار گیرند و از مصرف رنگ های مانده خودداری گردد. ناگفته نماند که از رنگ های حیاتی می شود به عنوان محکی برای تشخیص مرده یا زنده بودن سلول ها نیز استفاده کرد. مثلا در یاخته هایی که با قرمز خنثی رنگ شده اند، جنبش های سیکلوز را می توان مشاهده کرد.

روش قطره معلق: در این روش از یک لام ته دار استفاده می کنیم. اول نمونه را روی لامل می چکانیم  بعد از این مرحله لام ته دار را روی لامل می گذاریم به طوری که گودی لام روی نمونه قرار گیرد و بعد از آن لام را بر می گردانیم. حالا یک لام آماده برای بررسی میکروسکوپی داریم که لامل روی آن چسبیده شده. لازم به ذکر است که باید از بزرگنمایی ۴۰ استفاده کنیم. در این روش حرکت باکتری ها حجمی است.

روش رنگ‌آمیزی حیاتی سلول‌های پوششی مخاط دهان با رنگ سبز ژانوس:

کمی از مخاط درونی گونه را با استفاده از سواپ برداشته و روی لام قرار دهید .

یک قطره محلول آبی ۰٫۰۱% سبز ژانوس را روی لام بیفزائید و پس از قرار دادن لامل آن را به مدت ۵ تا ۱۰ دقیقه به حال خود بگذارید.

لام را با استفاده از بزرگ نمایی ۴۰ در زیر میکروسکوپ مشاهده کنید

 

روش رنگ‌آمیزی حیاتی سلول‌ها یخون با رنگ سبز ژانوس و قرمز خنثی:

۱)چند لام کاملا تمیز را در محلول 0.004%سبز ژانوس در الکل مطلق وچند لام تمیز دیگر را در محلول 0.05%قرمز خنثی در الکل مطلق فرو برید که رنگ سطح لام ها را کاملا بپوشاند.

2)لام ها را از رنگ خارج نموده و مدتی به حال خود بگذارید تا  کاملا خشک شود در اینجا حالت رنگ خشک شده باید به طور کاملا یکنواخت در سطح لام پخش شده باشد.

3)لامل را که در اتانول 95%خیسانده اید وکاملا تمیز است آماده کنید.

4)روی هر لام یک قطره کوچک خون قرار دهید.

5)سپس لامل را روی آن می گذاریم تا خون زیر آن پخش شود.

نتیجه:در لام هایی که با قرمز خنثی رنگ شده اند واکوئل هاوذرات درون سیتوپلاسمی گلبول های سفیدبه رنگ قرمز نارنجی یا زرد در می آید.

 

در لام هایی که با سبز ژانوس رنگ شده اند میتوکندری های گلبول های سفید سبز رنگ می شوند.

در هر دو حالت تا زمانی که سلول ها زنده اند هسته ها بی رنگ می مانند.

واضح ترین دلیل حیاتی بودن رنگ آمیزی و زنده بودن سلول ها حرکات آمیبی گلبول های سفید است.