رنگ آمیزی عمومی و مطالعه بافتهای تثبیت شده

چون اغلب رنگهای مورد استفاده محلول در آب هستند وتنها در محیط های آبی قدرت عمل دارند از این رو بافت های برش گیری شده از بلوک های پارافینی را نمیتوان مستقیما در محلولهای آبی رنگ وارد ساخت ورنگ آمیزی کرد بلکه لازم است که این گونه برشها را قبل از رنگ آمیزی پارافین زدایی کرده وپارافین درون آن را با آّب جایگزین ساخت تا قابلیت جذب رنگ های محلول در آب را پیدا کند.این عمل طی مراحلی عکس آنچه در آب گیری وشفاف کردن بافت انجام می پذیرد.

مراحل زیر را به ترتیب انجام میدهیم:

برای پارافین زدایی لام را در زایلون ۱ گذاشته به مدت ۲تا۳ دقیقه و سپس در زایلون ۲ به مدت ۲ تا ۳ دقیقه.

برای مرحله آبدهی به این صورت عمل میکنیم:در الکل مطلق به مدت ۱تا ۲ دقیه سپس در الکل ۹۵ به مدت ۱ دقیقه سپس در الکل۷۰ به مدت ۱ دقیقه وسرانجام در آب مقطر.زمان گذاشتن لام داخل آب مقطر نامحدود وبه میزان دلخواه است.

برای مرحله رنگ آمیزی اینگونه عمل میکنیم:

لام را در هموتوکسین به مدت ۱۵دقیقه میگذاریم .هماتوکسین باعث شده هسته ها به رنگ بنفش در بیاید.سپس لام را با پیست شست وشو داده تا رنگ های اضافی گرفته شودسپس در اسید کلرید۰.۲تا۰.۵ ٪محلول در الکل ۹۵ حداکثر به مدت ۳۰ ثانیه میگذاریم.سپس لام را در ائوزین۰.۱٪به مدت ۲تا ۵ دقیقه میگذاریم.ائوزین باعث شده سیتوپلاسم به رنگ صورتی دربیاید.سپس از آمونیا۱۲٪محلول در الکل۹۵ به عنوان تمایز دهنده قلیایی استفاده میکنیم تا رنگ ائوزین از مناطقی که لازم نیست خارج شود.این مرحله هم حداکر ۳۰ ثانیه زمان میبرد.

برای آبگیری مراحل زیر را انجام داده:

ابتدا در الکل ۹۵ به مدت ۱تا ۲ذقیقه وسپس در الکل۱۰۰ به مدت ۱تا ۲ دقیه میگذاریم.

برای مرحله شفاف سازی نیز لام را در زایلون۱ به مدت ۱تا ۲ دقیقه وسپس در زایلون ۲ به مدت ۱تا۲ دقیقه میگذاریم.

مرحله آخر مرحله مونتاز است وباید بلافاصله که لام را از زایلون۲ در آوردیم باید یک قطره چسب کانادابالزام یا انتلان بریزیم.دقت کنید که هوانگیرد.سپس لامل را گذاشته وحال لام آماده مطالعه است.

مطالعه سلول های کبدی تثبیت شده.

در کبد سیاهرگ سرخرگ مجاری صفراوی و....قابل مشاهده است.در بزرگنمایی کم یک زمینه نسبتا صورتی(سیتوپلاسم سلولها)با هسته های بنفش قابل مشاهده است.سلول ها حالت شعاعی دارن ودر لا به لای آنها فضاهایی به نام سینوزوئید وجود دارد که به رنگ زرد قهوای شفاف دیده میشوند که خون از بین این مجاری عبور میکند.در واقع در کبد تک تک سلول ها با خون در تماس هستند که برای حداکثر استفاده این لایه های سلولی به صورت کانالهای ناودانی قرارمیگیرند که حداکثر تماس را با خون وفضای سینوزوئیدی دارند. اگر در مراحل رنگ آمیزی برای فیکس کردن از اسمیک اسید استفاده کرده باشیم این کانال ها به رنگ سیاه دیده می شود.

مجاری صفراوی به صورت حفره هایی که سلول های اطراف آن سطح مربعی شکل با هسته گرد مرکزی دیده می شوند.

مویرگ های سیاهرگی به صورت حفره هایی که سلول های اطراف آن با هسته ی برجسته بنفش ودوتا سیتوپلاسم صورتی نازک اطراف آن دیده میشوند تقریبا مثل تخم مرغ شکسته شده وحالت قرارگیری سفیده و زده تخم مرغ.

مویرگ های سرخرگی هم به صورت حفره هایی که دور تادور آن مواج است دیده میشود که این به علت خاصیت ارتجاعی سرخرگ هاست.

اگر رنگ آمیزی اختصاصی انجام دهیم میتوانیم اندامک هارا به صورت اختصاصی ببینیم.